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1. 凝胶层析的基来源理:
凝胶层析(Gel Chromatography)是使用凝胶层析介质的网状结构,,,,,,,凭证分子巨细举行疏散的一种要领。。。。。。。其基来源理是含有差别尺寸巨细的分子进入层析柱后,,,,,,,较大的分子不可通过孔道扩散进入凝胶珠体内部,,,,,,,而与流动相一起流出层析柱;;;;;;;较小的分子可通过部分孔道,,,,,,,更小的分子可通过恣意孔道扩散进入珠体内部。。。。。。。这种颗粒内部扩散的效果,,,,,,,使小分子向柱下的移动减慢,,,,,,,从而样品凭证分子巨细的差别依次按一定顺序从柱内流出,,,,,,,一样平常是大分子先流出来,,,,,,,小分子后流出来,,,,,,,从而抵达疏散的目的。。。。。。。凝胶层析介质像分子筛一样,,,,,,,将巨细差别的分子举行疏散,,,,,,,因此,,,,,,,凝胶层析又叫分子筛层析或称尺寸排阻层析。。。。。。。
层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,,,,,,,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,,,,,,,小分子物质能进入其内部,,,,,,,流下来速率慢,,,,,,,而大分子物质却被扫除在外部,,,,,,,下来的速率快,,,,,,,当混淆溶液通过凝胶过滤层析柱时,,,,,,,溶液中的物质就按差别分子量筛脱离了。。。。。。。
2. 凝胶层析的优点:
疏散条件温顺,,,,,,,可在多种条件下事情。。。。。。。凝胶层析介质为不带电荷的惰性物质,,,,,,,不与溶质分子爆发作用,,,,,,,疏散条件温顺,,,,,,,卵白质维持原结构,,,,,,,故不易变性,,,,,,,可坚持被疏散因素的理化性子。。。。。。。凝胶层析可在相当广的温度规模内举行操作,,,,,,,因此更适用于某些不稳固的分子,,,,,,,尤其是那些对pH值、金属离子浓度敏感的、对情形要求苛刻的生物分子的疏散。。。。。。。为知足卵白质的特殊要求,,,,,,,可以在多种条件下举行疏散,,,,,,,如在高离子强度、低离子强度,,,,,,,以及脲、盐酸胍保存的情形下举行疏散。。。。。。。
卵白质接纳率高。。。。。。。目的卵白质的接纳率很高,,,,,,,险些可达100%,,,,,,,且实验重现性好。。。。。。。
应用面普遍。。。。。。。事情规模广,,,,,,,疏散分子量的笼罩面大,,,,,,,可疏散相对分子质量从几百到数百万的分子,,,,,,,尤其适用于活性大分子的疏散。。。。。。。凝胶层析对情形的要求不严酷,,,,,,,可以在低温下操作,,,,,,,也可在37℃下举行疏散,,,,,,,还可以凭证卵白质的需求选用多种缓冲液。。。。。。。
装备简朴,,,,,,,易于操作。。。。。。。凝胶层析的装备简朴,,,,,,,易于操作,,,,,,,周期短,,,,,,,每次疏散之后介质不需再生,,,,,,,故可一连使用,,,,,,,有的凝胶层析柱可一连应用几百次甚至上千次。。。。。。。
3. 凝胶层析的应用:
脱盐:高分子(如卵白质、核酸、多糖等)溶液中的低分子量杂质,,,,,,,可以用凝胶层析法除去,,,,,,,这一操作称为脱盐。。。。。。。本法脱盐操作轻盈、快速、卵白质和酶类等在脱盐历程中不易变性。。。。。。。
疏散提纯:凝胶层析法已普遍用于酶、卵白质、氨基酸、多肽、多糖、核酸、激素、疫苗、生物碱等物质的疏散提纯。。。。。。。凝胶对热原有较强的吸附力,,,,,,,可用往复除无离子水中的致热原制备注射用水。。。。。。。
分子量的测定:用一系列已知分子量的标准品放入统一凝胶柱内,,,,,,,在统一条件下层析,,,,,,,纪录每一分钟因素的洗脱体积,,,,,,,并以洗脱体积对分子量的对数作图,,,,,,,在一定分子量规模内可得一直线,,,,,,,即分子量的标准曲线。。。。。。。测定未知物质的分子量时,,,,,,,可将此样品加在测定了标准曲线的凝胶柱内洗肿后,,,,,,,凭证物质的洗脱体积,,,,,,,在标准曲线上查出它的分子量。。。。。。。
高分子溶液的浓缩:通常将凝胶层析介质干胶投入到稀的高分子溶液中,,,,,,,这时水分和低分子量的物质就会进入凝胶粒子内部的孔隙中,,,,,,,而高分子物质则排阻在凝胶颗粒之外,,,,,,,再经离心或过滤,,,,,,,将溶胀的凝胶疏散出去,,,,,,,就获得了浓缩的高分子溶液。。。。。。。
凝胶层析因其条件温顺,,,,,,,操作简朴,,,,,,,卵白质接纳率高及重现性好等特点,,,,,,,在生物化学、医学及分子生物学等方面获得普遍的应用,,,,,,,如卵白质、酶、多肽、抗体及激素的疏散纯化,,,,,,,分子量测定及多聚体研究,,,,,,,临床剖析,,,,,,,热原去除及药物制备等,,,,,,,在轻工食物等领域也获得极为普遍的应用。。。。。。。
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